Purification and properties of a (1à6)-β-glucanase

Purification and properties of a (1à6)-β-glucanase from Acremonium sp. IMI 383068

1. Apa jenis enzim yang diproduksi?

2. Bagaimana cara kerja enzim tersebut?

3. Gambarkan struktur kimia substrat enzim tersebut!

4. Jelaskan sifat fisika dan kimia dari enzim tersebut!

5. Jelaskan bagaimana mekanisme pemanenan dan pemurnian enzim tersebut!

Jawab :

1.      Jenis enzim yang dihasilkan adalah (1à6)-β-glucanase yang diproduksi dari jamur Acremonium sp. Enzim yang dihasilkan berupa enzim ekstraseluler.

2.      Cara kerja enzim (1→6)-β-glucanase  

Cara kerja enzim (1→6)-β-glucanase adalah mendegradasi β-glucan. Degradasi tersebut menghasilkan ikatan (1→3) dan (1→6)-β-glucan, selain itu enzim diklasifikasikan atas dasar tindakan hidrolitik sebagai endo-atau ekso-enzim. Degradasi dari enzim(1→6)-β-glucanase pada pustulan konsisten dengan (1 → 6)-β-glucanase yang memiliki modus endo-hidrolitik. Enzim (1→3)-β-glucanase dihidrolisis karena pustulan merupakan substrat yang menunjukkan aktivitas tertinggi. Hal ini menyebabkan kerja enzim spesifik yaitu hanya mendegradasi (1→6)-β-glucanase.

3.     

Ikatan 1,6 diperoleh dari dua glukosa yang berikatan glikosida yang rantai karbon no.1 pada rantai karbon pertama berikatan dengan rantai karbon no.6 pada rantai karbon kedua. Hal inilah yang menyebabkan ikatan ini dinamakan ikatan 1,6-β -glukan.

4.      Sifat Fisik dan Sifat Kimia

Sifat fisik dan kimia dari enzim (1→6)-β-glucanase yaitu suhu dan pH. Aktifitas optimal enzim (1→6)-β-glucanase pada suhu 40^oC sampai 50^oC. Enzim (1→6)-β-glucanase aktivitasnya berjalan optimal pada pH  5-6,5. Enzim ini juga termasuk Endo-hidrolitik dan hanya mampu menghidrolisis substrat yang mengandung1-6 β-glikosidik.

5.      Mekanisme pemanenan dan pemurnian enzim

Proses pemurnian dan pemanenan enzim (1→6)-β-glucanase dari jamur Acremonium sp dilakukan pada suhu 40C dengan penambahan 1 mm fenil metil sulphonyl fluorida (PMSF), 20 mm dithiothreifol dan 10 mm EDTA ke dalam filtrat. Konsetrat ekstrak ini dikondisikan pada pH 6 dengan penambahan NaOH dan di fraksinisasi dengan (NH4)2SO4 secara perlahan. Kemudian hasil endapan dilarutkan dalam buffer pH bitris 20 mm 6 kemudian  disimpan pada suhu -70⁰C. FPLC dengan Q kolom anion mono exchange digunakan untuk pemurnian (1→6)-β-glukanase setelah ekuilibrasi dengan buffer pH bistris 20 mm 6.FPLC berfungsi untuk menghomogenitaskan enzim (1→6)-β-glukanase.